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---液相色谱法概述

---液相色谱(hplc)是20世纪60年代后期发展起来的分离分析技术,是现代分离测定的重要手段。问世以来,因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学及---分析。

在现代---液相色谱分析中,色谱柱的选择直接影响了分离效果的好坏,---液相色谱---,选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需的时间,并且使方法更具稳定性。





液相色谱理论发展简况

色谱法的分离原理是:溶于流动相 (mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase) 发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,---液相色谱报价,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。    色谱法很早是由植物学家茨维特(tswett)在1906年研究用碳酸钙分离植---素时发现的,tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱)描述他的实验,---液相色谱,色谱法(chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为---液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。



色谱柱的安装

(1)拆开柱包装盒,确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。

(2)拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。

(3)按柱管上标示的流动相流向,将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如,条件允许,---液相色谱便宜,建议在柱前使用保护柱);柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57 mm、内径为0.1~0.3 mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底,然后顺时针拧紧空心螺钉,直到拧不动为止。




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